Polüpeptiidide lahustumine
Igal aminohappel on omased keemilised omadused ja peptiidi lahustuvus sõltub selle järjestusest ja modifikatsioonidest. Enne kõigi peptiidide lahustamist soovitame lahustuvuse testimiseks võtta väikese koguse peptiidi.
Peptiidide lahustamine on väga oluline samm. Ebaõige solubiliseerimine võib põhjustada peptiidi kadu või katse ebaõnnestumist. Peptiidide lahustuvus sõltub peamiselt peptiidi järjestusest, seega olge peptiidi kavandamisel tähelepanelik. Peptiidjärjestus peaks sisaldama 20% laetud jääke, et suurendada selle lahustuvust.
Enne kasutamist saavad kliendid peptiidi lahustamiseks sobiva lahusti valimiseks järgida järgmist kolme põhiprintsiipi.
Esiteks peab valitud lahusti suutma peptiidi täielikult lahustada; Teiseks peab valitud lahusti sobima katsetingimustega; Lõpuks ei tohi valitud lahusti peptiidiga reageerida ega seda lagundada.
Niikaua kui peptiidi kogus lubab, võite esmalt lahustada väikese osa peptiidist ja seejärel lahustada kogu proovi. Kui teil on vaja peptiidi lahustist eraldada, võite valida algse lahusti, mis muudab selle pärast lüofiliseerimist hõlpsasti eemaldatavaks.
Järgmised soovitused võivad aidata teil peptiide lahustada:
Alla 5 aminohappega peptiidid lahustuvad üldiselt vesilahustes ja tugevalt hüdrofoobsed aminohapped (W, I, L, F, M, V, Y), v.a.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25% hüdrofiilsete peptiidide laetud aminohappeid (E, D, K, R, H) ja sisaldavad<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% laetud aminohapped võivad olla ka vees lahustumatud või osaliselt lahustuvad. Parim on esmalt lahustada peptiid minimaalses koguses tugevas orgaanilises lahustis, nagu DMF, ACN, isopropüülalkohol, etanool, äädikhape, 4–8 M GdnHCl, uurea või DMSO (mitte järjestuses C, W, M ) ja muudes sarnastes orgaanilistes lahustites. Peptiidi lahustavat orgaanilist lahustit on kõige parem lisada vesilahusesse aeglaselt tilkhaaval. Kui lahus muutub häguseks, võib see olla saavutanud lahustuvuse piiri ja selle lahustamise jätkamisest pole kasu. Tuleb märkida, et algselt valitud lahusti peaks katsesüsteemiga ühilduma.
Hydrophobic amino acid content >75% Tugevalt hüdrofoobsed peptiidid on üldiselt ka vesilahustes lahustumatud. Ka selliseid peptiide tuleks esmalt töödelda tugevate orgaaniliste lahustitega (nt TFA, sipelghape) lahustuvad ja võivad vesilahusele lisamisel ka sadestuda. Lõpliku peptiidilahuse denatureerimiseks võib vaja minna orgaaniliste lahustite kõrgeid kontsentratsioone ja orgaanilisi lahusteid ei kasutata üldiselt elusrakkude bioloogilise funktsiooni uuringutes.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Polüpeptiidjärjestused kipuvad moodustama üleliigseid molekulidevahelisi vesiniksidemete võrgustikke ja kergesti moodustama geele kontsentreeritud vesilahustes. Selliseid peptiide saab solubiliseerida, nagu on kirjeldatud etapis 3. Et vähendada võimalikke probleeme lahustumisel, on klientidel soovitatav pöörata rohkem tähelepanu konstruktsioonile ja järjestusele, et parandada peptiidi lahustuvust.